目 錄
圖片目錄
表格目錄
方案目錄
短篇綜述目錄
第1章 緒論 1
1.1歷史背景 2
1.2組織培養(yǎng)的優(yōu)點 10
1.2.1環(huán)境控制 10
1.2.2樣品的特征和均一性 11
1.2.3經(jīng)濟、規(guī)模和機械化 11
1.2.4體內(nèi)環(huán)境的體外模擬 11
1.3局限性 11
1.3.1專業(yè)技能 11
1.3.2量的問題 12
1.3.3去分化和選擇 12
1.3.4細胞的起源 13
1.3.5不穩(wěn)定性 13
1.4體外的主要差異 13
1.5組織培養(yǎng)的類型 14
參考文獻 16
第2章 培養(yǎng)細胞的生物學(xué) 21
2.1細胞培養(yǎng)環(huán)境 21
2.2細胞黏附 21
2.2.1細胞黏附分子 22
2.2.2細胞間連接 23
2.2.3細胞骨架 24
2.2.4細胞外基質(zhì) 24
2.2.5細胞遷移 25
2.3細胞增殖 26
2.3.1細胞周期 26
2.3.2細胞增殖調(diào)控 27
2.4細胞分化 27
2.4.1細胞分化的謗導(dǎo)和保持 30
2.4.2細胞分化及去分化潛能 31
2.5細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 32
2.6能量代謝 34
2.7培養(yǎng)細胞的起源 34
2.7.1培養(yǎng)的開始 35
2.7.2細胞系的演化 36
2.7.3細胞的衰老 36
2.7.4連續(xù)細胞系的轉(zhuǎn)化和建立 36
2.8術(shù)語定義 38
參考文獻 39
第3章 實驗室設(shè)計及布局 42
3.1布局、陳設(shè)和服務(wù)設(shè)施 42
3.1.1必備條件 44
3.1.2服務(wù) 48
3.1.3通風(fēng)裝置 48
3.2設(shè)計與布局 49
3.2.1無菌操作區(qū) 49
3.2.2層流柜 50
3.2.3工作臺 50
3.2.4檢疫和防范 50
3.2.5培養(yǎng) 51
3.2.6準(zhǔn)備區(qū) 54
3.2.7儲存 55
3.3災(zāi)害管理 57
參考文獻 58
第4章 設(shè)備和材料 59
4.1組織培養(yǎng)實驗室的要求 59
4.2無菌工作區(qū) 61
4.2.1層流生物安全柜 61
4.2.2手推車 63
4.2.3無菌液體處理——移液和分液 63
4.2.4倒置顯微鏡 69
4.2.5照相機和監(jiān)視器 71
4.2.6解剖顯微鏡 71
4.2.7離心機 71
4.2.8細胞計數(shù) 72
4.3孵育和培養(yǎng) 73
4.3.1恒溫箱 73
4.3.2濕式C07培養(yǎng)箱 73
4.3.3溫度記錄儀 76
4.3.4滾筒支架 76
4.3.5磁力攪拌器 77
4.3.6培養(yǎng)器皿 77
4.4準(zhǔn)備和滅菌 78
4.4.1洗滌 78
4.4.2培養(yǎng)基和試劑的制備 79
4.4.3滅菌 80
4.5儲存 82
4.5.1耗材 82
4.5.2冰箱和冷凍箱 82
4.5.3凍存容器 83
4.5.4程序降溫儀 83
4.6實驗室輔助設(shè)備 84
4.6.1計算機和網(wǎng)絡(luò) 84
4.6.2正置顯微鏡 84
4.6.3低溫冷凍箱 84
4.6.4共聚焦顯微鏡 85
4.6.5PCR熱循環(huán)儀 85
4.7專用設(shè)備 85
4.7.1顯微注射裝置 85
4.7.2菌落計數(shù)器 85
4.7.3離心式淘洗器 85
4.7.4沆式細胞儀 86
參考文獻 86
第5章 無菌技術(shù) 87
5.1無菌技術(shù)的目的 87
5.1.1污染風(fēng)險 87
5.1.2維持無菌狀態(tài) 88
5.2無菌環(huán)境的基本要素 89
5.2.1層流 90
5.2.2安靜區(qū)域 91
5.2.3操作臺 92
5.2.4個人衛(wèi)生 93
5.2.5試劑和培養(yǎng)基 94
5.2.6培養(yǎng)物 94
5.3無菌處理 94
5.3.1擦拭 94
5.3.2加蓋 94
5.3.3灼燒 95
5.3.4試劑瓶和培養(yǎng)瓶的操作 95
5.3.5移液 96
5.3.6大容量移液 97
5.3.7液體傾倒 97
5.4標(biāo)準(zhǔn)化操作 97
5.4.1培養(yǎng)瓶和試劑瓶 103
5.4.2培養(yǎng)皿和多孔培養(yǎng)板 103
5.5儀器和設(shè)備 104
5.5.1冰箱和冷室 104
5.5.2恒溫箱 104
5.5.3盒裝培養(yǎng)物 106
5.5.4充入C07氣體 106
參考文獻 107
第6章 安全性、生物倫理及驗證 108
6.1實驗室安全 108
6.2危險性評估 108
6.3標(biāo)準(zhǔn)操作程序 110
6.4安全規(guī)則 110
6.5常規(guī)安全 112
6.5.1操作者 112
6.5.2設(shè)備 113
6.5.3玻璃器皿和銳利物品 113
6.5.4化學(xué)毒性 1 14
6.5.5氣體 115
6.5.6液氮 116
6.5.7燒傷 116
6.6火 116
6.7電離輻射 117
6.7.1攝入 117
6.7.2放射性廢物的處理 117
6.7.3標(biāo)記試劑的輻照 118
6.7.4高能源輻照 118
6.8生物危害性 118
6.8.1生物防范水平 118
6.8.2生物安全柜(BSC) 121
6.8.3人體活檢材料 123
6.8.4細胞系 125
6.8.5遺傳操作 126
6.8.6生物危險性廢物的處理 126
6.8.7凈化和熏蒸 126
6.9生物倫理 127
6.9.1動物組織 127
6.9.2人體組織 127
6.10質(zhì)量保證 129
6.10.1操作程序 129
6.10.2質(zhì)量控制(QC) 129
6.10.3確認 130
6.10.4身份驗證 130
6.10.5起源 130
6.10.6污染 131
參考文獻 131
第7章 培養(yǎng)器皿和附著物 134
7.1附著物 134
7.1.1附著和生長 134
7.1.2常用的附著材料 134
7.1.3附著物替代品 135
7.2表面處理 136
7.2.1附著物包被 136
7.2.2飼養(yǎng)層 138
7.2.3非黏性附著物 139
7.3培養(yǎng)器皿的選擇 1 39
7.3.1細胞產(chǎn)量 140
7.3.2多孔板 141
7.3.3培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿 142
7.3.4高細胞產(chǎn)量 143
7.3.5懸浮培養(yǎng) 144
7.3.6通氣 144
7.3.7取樣和分析 145
7.3.8不均勻生長 146
7.3.9成本 146
7.4特殊系統(tǒng) 147
7.4.1滲透性支持物 147
7.4.2三維基質(zhì) 148
參考文獻 148
第8章 成分明確培養(yǎng)基及補充物 151
8.1培養(yǎng)基的發(fā)展史 151
8.2物理化學(xué)特征 152
8.2.1pH 152
8.2.2C07和碳酸鹽 1 53
8.2.3緩沖作用 155
8.2.4氧氣 155
8.2.5滲透壓 164
8.2.6溫度 165
8.2.7黏度 166
8.2.8表面張力和成泡性 166
8.3平衡鹽溶液 166
8.4完全培養(yǎng)基 167
8.4.1氨基酸 167
8.4.2維生素 168
8.4.3鹽糞 169
8.4.4葡萄糖 169
8.4.5有機補充物 169
8.4.6激素和生長因子 169
8.4.7抗生素 170
8.5血清 170
8.5.1蛋白質(zhì) 172
8.5.2生長因子 172
8.5.3激素 173
8.5.4營養(yǎng)物及代謝物 1 73
8.5.5脂類 173
8.5.6礦物質(zhì) 173
8.5.7抑制物 173
8.6培養(yǎng)基和血清的選擇 174
8.6.1血清批次預(yù)約 176
8.6.2血清的測試 176
8.6.3熱滅活 177
8.7其他添加物 177
8.7.1氨基酸水解物 177
8.7.2胚胎浸出液 177
8.7.3適應(yīng)性培養(yǎng)基 177
8.8儲存 178
參考文獻 178
第9章 無血清培養(yǎng)基 181
9.1血清的缺點 189
9.2無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點 190
9.3無血清培養(yǎng)基的缺點 190
9.4血清的替代 191
9.4.1無血清培養(yǎng)基的商業(yè)供應(yīng) 191
9.4.2血清替代物 191
9.4.3無血清傳代培養(yǎng) 193
9.4.4激素 193
9.4.5生長因子 194
9.4.6血清中的營養(yǎng)物質(zhì) 194
9.4.7蛋白質(zhì)和多聚胺 199
9.4.8黏度 199
9.5無血清培養(yǎng)基的研發(fā) 199
9.6無血清培養(yǎng)基的選擇 200
9.6.1細胞或產(chǎn)物特異性 200
9.6.2細胞系對無血清培養(yǎng)基的適應(yīng)性 200
9.7無血清培養(yǎng)基的制備 204
9.8無動物蛋白培養(yǎng)基 204
9.9小結(jié) 204
參考文獻 205
第10章 準(zhǔn)備與滅菌 209
10.1準(zhǔn)備試劑與用品 209
10.2設(shè)備與液體的滅菌 209
10.2.1干熱滅菌 210
10.2.2壓力一蒸汽滅菌 210
10.2.3射線滅菌 211
10.2.4化學(xué)滅菌 211
10.2.5無菌指示器 211
10.2.6過濾滅菌 212
10.3設(shè)備 214
10.3.1玻璃器皿 214
10.3.2玻璃移液管 217
10.3.3嫘口蓋 219
10.3.4清潔劑的選擇 222
10.3.5種類繁雜的設(shè)備 222
10.3.6可重復(fù)使用的滅菌過濾器 224
10.4試劑與培養(yǎng)基 225
10.4.1水 226
10.4.2純水器的維護 228
10.4.3平衡鹽溶液 228
10.4.4培養(yǎng)基的配制與滅菌 230
10.5培養(yǎng)基的滅菌 235
10.5.1可高壓滅菌的培養(yǎng)基 235
10.5.2除菌過濾 235
10.5.3血清 244
10.5.4其他試劑的準(zhǔn)備與滅菌 244
10.6培養(yǎng)基的質(zhì)控、檢測和儲存 244
10.6.1質(zhì)量控制 244
10.6.2無菌檢測 245
10.6.3培養(yǎng)基和血清的培養(yǎng)檢測 245
10.6.4儲存 251
參考文獻 252
窘11章 原代培養(yǎng) 253
11.1原代培養(yǎng)入門 253
11.1.1用于解離組織的蛋白酶 253
11.1.2解離過程的共同特點 255
11.2組織分離 256
11.2.1小鼠胚胎 256
11.2.2雞胚 260
11.2.3人體活檢材料 261
11.3屎代培養(yǎng)的類型 263
11.3.1原代外植 263
11.3.2酶的解離作用 266
11.3.3溫胰蛋白酶消化 267
11.3.4低溫預(yù)處理的胰蛋白酶消化 270
11.3.5雞胚器官原基 273
11.3.6其他酶解過程 277
11.3.7膠原酶 277
11.3.8機械法解離 279
11.3.9分離活細胞 281
11.3.10原代培養(yǎng)小結(jié) 283
11.3.11原始記錄 283
參考文獻 284
窘12章 傳代培養(yǎng)和細胞系 286
12.1術(shù)語定義 286
12.2傳代培養(yǎng)和擴增 286
12.2.1交叉污染和鑒定錯誤 289
12.2.2支原體污染 289
12.2.3細胞系的命名 290
12.2.4培養(yǎng)物的年齡 290
12.2.5有限細胞系和連續(xù)
細胞系 291
12.3選擇細胞系 291
12.4常規(guī)培養(yǎng) 292
12.4.1細胞形態(tài)的意義 292
12.4.2培養(yǎng)基的更換 294
12.4.3標(biāo)準(zhǔn)的換液方案 294
12.5傳代 296
12.5.1傳代標(biāo)準(zhǔn) 297
12.5.2單層生長細胞典型的傳代方案 299
12.5.3生長周期和傳代比率 303
12.5.4懸浮培養(yǎng)細胞的擴增 307
12.5.5懸浮生長細胞的傳代 309
12.5.6培養(yǎng)條件的標(biāo)準(zhǔn)化 311
12.5.7抗生素的使用 311
12.5.8培養(yǎng)記錄 312
參考文獻 314
第13章 身份認證和驗證 316
13.1細胞系的身份認證 316
13.1.1錯誤身份認定和交叉污染 316
13.1.2錯誤身份認定和交叉污染的原因 320
13.1.3避免錯誤身份認定和交叉污染 321
13.1.4細胞系身份認證的技術(shù) 321
13.1.5DNA繪譜 322
13.1.6通過DNA條碼測定動物細胞的種屬 330
13.1.7同工酶分析 336
13.1.8染色體含量 341
13.1.9染色體顯帶枝術(shù) 344
13.1.10染色體分析 345
13.1.11身份認證的必要性 345
13.2細胞身份的驗證 346
13.2.1細胞的身世記錄 347
13.2.2微生物污染 347
13.2.3步驟 347
13.3質(zhì)量保證 348
13.3.1細胞系 348
13.3.2培養(yǎng)基和試劑 348
13.3.3培養(yǎng)器皿 348
13.3.4儀器 348
13.3.5設(shè)施 349
參考文獻 349
第14章 污染 352
14.1污染的來源 352
14.1.1操作者的技術(shù) 355
14.1.2環(huán)境 355
14.1.3生物安全柜的使用和維護 356
14.1.4濕度恒溫箱 356
14.1.5冷藏庫 357
14.1.6無菌材料 357
14.1.7引入的細胞系和活組織 357
14.1.8隔離 357
14.2微生物污染的種類 357
14.3污染物的監(jiān)控 358
14.3.1可見的微生物污染 358
14.3.2支原體 360
14.3.3支原體的熒光染色 361
14.3.4PCR法檢測支原體 365
14.3.5栓測支原體的替代方法 366
14.3.6支原體檢測服務(wù) 367
14.3.7病毒污染 367
14.4污染培養(yǎng)物的處理 368
14.5污染的去除 368
14.5.1細菌、真菌和酵母菌 368
14.5.2支原體的消除 369
14.5.3清除病毒污染 371
14.5.4頑固污染 371
14.6交叉污染 372
14.7結(jié)論 372
參考文獻 372
第15章 凍存和建庫 374
15.1凍存的意義 374
15.2凍存前的注意事項 374
15.2.1鑒定 375
15.2.2何時凍存 375
15.3凍存細則 375
15.3.1細胞凍存的理論背景 375
15.3.2細胞濃度 376
15.3.3凍存液 376
15.3.4冷卻速度 377
15.3.5凍存管 380
15.3.6低溫冰箱 381
15.3.7培養(yǎng)細胞的凍存 385
15.3.8凍存記錄 387
15.3.9凍存管的解凍 388
15.3.10培養(yǎng)瓶凍存 391
15.3.11玻璃化保存 391
15.4凍存庫的設(shè)計和監(jiān)控 392
15.4.1庫存管理、分配和使用 393
15.4.2細胞庫存的連續(xù)更換 394
15.5細胞庫 394
15.6細胞的運輸 395
15.6.1凍存管 396
15.6.2活細胞 397
參考文獻 398
第16章 克隆培養(yǎng)及篩選 400
16.1細胞的克隆培養(yǎng) 400
16.2貼壁率的刺激 404
16.2.1促進克隆生長的條件 405
16.2.2條件培養(yǎng)基 406
16.2.3飼養(yǎng)層細胞 407
16.3懸浮克隆培養(yǎng) 409
16.4細胞克隆的分離 414
16.4.1單層貼壁細胞克隆的其他分離技術(shù) 416
16.4.2悉浮細胞克隆 417
16.5復(fù)制性培養(yǎng) 418
16.6選擇性培養(yǎng)基和抑制劑 418
16.7細胞與基質(zhì)的相互作用 420
16.'7.1選擇性黏附 420
16.7.2選擇性脫壁 420
16.7.3基質(zhì)性質(zhì) 420
16.7.4選擇性飼養(yǎng)層 421
16.7.5半固體培養(yǎng)基選擇 421
參考文獻 422
第17章 細胞分選 425
17.1細胞密度及等密度沉降法 425
17.2細胞體積與沉降速率 429
17.2.1單位重力沉降 429
17.2.2離心淘洗分離技術(shù) 429
17.3以抗體為基礎(chǔ)的分選技術(shù) 431
17.3.1免疫磁珠分選 431
17.3.2熒光活化的細胞分選法 434
17.4初試細胞分離者的選擇 435
參考文獻 435
第18章 細胞系鑒定 437
18.1鑒定的需求 437
18.2基因型鑒定 437
18.2.1真實性驗證 438
18.2.2種屬鑒定 438
18.2.3轉(zhuǎn)化 438
18.3表型鑒定 438
18.3.1譜系或組織標(biāo)記 438
18.3.2獨特標(biāo)記物 441
18.4細胞形態(tài)孛 441
18.4.1顯微鏡 446
18.4.2染色 447
18.4.3細胞學(xué)檢查所用培養(yǎng)器皿：單層培養(yǎng) 449
18.4.4懸浮細胞細胞學(xué)檢查的標(biāo)本制備 450
18.4.5光學(xué)顯微照相技術(shù) 451
18.4.6活細胞成像 453
18.4.7共聚焦顯微鏡 453
18.5抗原標(biāo)記 453
18.5.1免疫染色 455
18.5.2免疫分析 456
18.6間隔性記錄 457
18.7細胞周期 459
18.7.1細胞分離 459
18.7.2阻斷 459
參考文獻 460
第19章 分化 462
19.1體內(nèi)表型的表達 462
19.1.1去分化 463
19.1.2細胞譜系選擇 463
19.2分化階段 463
19.3增殖和分化 464
19.4定向和細胞譜系 464
19.5干細胞可塑性 465
19.6分化標(biāo)記物 466
19.7誘導(dǎo)分化 467
19.'7.1細胞相互作用 467
19.7.2全身性因子 469
19.7.3細胞一基質(zhì)相互作用 472
19.7.4極性和細胞形狀 473
19.7.5動態(tài)應(yīng)激 474
19.'7.6氧張力 474
19.8分化和惡性 474
19.9應(yīng)用 474
參考文獻 475
第20章 三維培養(yǎng) 481
20.1細胞的相互作用和表型表達 481
20.1.1三維培養(yǎng)的優(yōu)點和局限性 482
20.1.2模型的選擇 483
20.2器官培養(yǎng) 487
20.2.1氣體和營養(yǎng)物質(zhì)的交換 487
20.2.2結(jié)構(gòu)的完整性 488
20.2.3生長與分化 488
20.2.4器官培養(yǎng)的局限性 489
20.2.5器官培養(yǎng)的類型 489
20.3組織型培養(yǎng) 491
20.3.1凝膠和海綿技術(shù) 491
20.3.2中空纖維 492
20.3.3細胞球體 492
20.3.4慧滴培養(yǎng) 495
20.3.5微載體 496
20.3.6類器官 496
20.3.7轉(zhuǎn)動室系統(tǒng) 497
20.3.8藻酸鹽活細胞固定術(shù) 498
20.3.9濾膜小皿插件 498
20.3.10神經(jīng)聚集物的培養(yǎng) 501
20.4器官型培養(yǎng) 503
20.4.1組織等同物 503
20.4.2組織工程 503
20.5三維構(gòu)建物中細胞的成像 505
參考文獻 505
第21章 規(guī)模與自動化 510
21.1規(guī)模懸浮培養(yǎng) 510
21.1.1連續(xù)和分批培養(yǎng) 513
21.1.2 次性生物反應(yīng)器 514
21.1.3規(guī)模和復(fù)雜性 514
21.1.4攪勻和換氣 514
21.2單層規(guī)模培養(yǎng) 519
21.2.1多表面擴增器 520
21.2.2旋轉(zhuǎn)培養(yǎng) 523
21.2.3微載體 526
21.2.4巨型微載體 529
21.2.5灌流式單層培養(yǎng) 530
21.3程序控制 530
21.4大規(guī)模培養(yǎng)程序 532
21.5自動化 535
21.5.1機器人培養(yǎng)細胞 536
21.5.2高通量篩選(HTS) 537
21.5.3二維高通量篩選 537
參考文獻 540
第22章 衰老，永生化和轉(zhuǎn)化 542
22.1在細胞系特征描述中的作用 543
22.2遺傳不穩(wěn)定性和異質(zhì)性 544
22.2.1遺傳不穩(wěn)定性 544
22.2.2染色體畸變 545
22.3永生化 545
22.3.1衰老的控制 546
22.3.2病毒基因致永生化 547
22.3.3人成纖維細胞的永生化 550
22.3.4端粒酶誘導(dǎo)的永生化 554
22.3.5供選擇的永生化策略 558
22.4生長控制異常 559
22.4.1停泊不依賴性 559
22.4.2接觸抑制 560
22.4.3血清依賴 562
22.4.4癌基因 562
22.5致瘤性 563
22.5.1惡性化 563
22.5.2腫瘤移植 563
22.5.3侵襲力 564
22.5.4血管發(fā)生 565
22.5.5纖溶酶原活化因子 568
參考文獻 569
第23章 定量 574
23.1細胞計數(shù) 574
23.1.1血細胞計數(shù)器 575
23.1.2電子計數(shù) 579
23.1.3染色的單層細胞 583
23.1.4流式細胞儀 584
23.2細胞重量和細胞壓積 585
23.3 DNA含量 586
23.4蛋白質(zhì) 586
23.5合成速率 586
23.5.1DNA合成 586
23.5.2蛋白質(zhì)合成 586
23.6準(zhǔn)備樣品用于酶分析和免疫分析 587
23.7細胞計數(shù) 587
23.7.1原位標(biāo)記 587
23.7.2流式細胞術(shù) 587
23.8重復(fù)取樣 587
23.8.1數(shù)據(jù)獲得 588
23.8.2數(shù)據(jù)分析 588
23.9細胞增殖 589
23.9.1買驗設(shè)計 590
23.9.2生長周期 590
23.9.3單層細胞生長曲線的分析 593
23.9.4培養(yǎng)基體積、細胞濃度和細胞密度 595
23.9.5悉浮培養(yǎng) 597
23.9.6生長周期的各個階段 598
23.9.7生長曲線的衍生物 599
23.10貼壁效率 600
23.10.1集落形成分析 602
23.10.2自動集落計數(shù) 603
23.11標(biāo)記指數(shù) 604
23.11.1生長分?jǐn)?shù) 604
23.11.2有絲分裂指數(shù) 605
23.11.3分裂指數(shù) 605
23.12放射自顯影術(shù) 606
23.13細胞周期時間 607
23.14細胞遷移 608
參考文獻 608
第24章 細胞毒性 610
24.1活性、毒性和存活 610
24.2體外局限性 611
24.2.1藥物代謝動力學(xué) 611
24.2.2新陳代謝 611
24.2.3組織和全身反應(yīng) 612
24.3分析方法的類型 612
24.3.1生存力 612
24.3.2存活 615
24.3.3細胞增殖測定 620
24.3.4代謝性細胞毒性測定 620
24.3.5微滴定實驗 620
24.3.6微滴定與克隆存活的比較 625
24.3.7藥物的相互作用 625
24.4細胞毒性實驗的虛用 626
24.4.1抗癌藥物篩選 626
24.4.2腫瘤藥物的前瞻性實驗 626
24.4.3藥物學(xué)實驗 627
24.5基因毒性 627
24.5.1姐妹染色單體交換的誘變實驗 627
24.5.2致癌性 627
24.6炎癥反應(yīng) 628
參考文獻 629
第25章 特殊類型細胞的培養(yǎng) 632
25.1特殊細胞培養(yǎng)技術(shù) 635
25.2上皮細胞 635
25.2.1表皮 636
25.2.2角膜 637
25.2.3乳腺 637
25.2.4子宮頸 637
25.2.5胃腸道 638
25.2.6肝 638
25.2.7人肝細胞系HepaRG 639
25.2.8胰 640
25.2.9氣管和支氣管上皮 640
25.2.10口腔上皮 640
25.2.11前列腺 640
25.3間充質(zhì)細胞 640
25.3.1結(jié)締組織 641
25.3.2脂肪組織 641
25.3.3肌 641
25.3.4軟骨 642
25.3.5骨 643
25.3.6內(nèi)皮細胞 643
25.4神經(jīng)外胚層細胞 643
25.4.1神經(jīng)細胞 643
25.4.2神經(jīng)膠質(zhì)細胞 644
25.4.3內(nèi)分泌細胞 646
25.4.4黑素細胞 646
25.5造血細胞 647
25.5.1紅細胞 647
25.5.2髓細胞和巨噬細胞 647
25.5.3淋巴細胞 648
25.6單克隆抗體的制備 648
25.7生殖腺 650
25.7.1卵巢 650
25.'7.2睪丸 650
25.8冷血動物細胞的培養(yǎng) 650
25.8.1魚細胞 651
25.8.2昆蟲細胞 651
25.9腫瘤細胞培養(yǎng) 651
25.10馭材 652
25.10.1代表性細胞的選擇 652
25.10.2組織的冷凍保存 653
25.11分離 653
25.12原代培養(yǎng) 654
25.13腫瘤細胞的選擇培養(yǎng) 655
25.13.1選擇培養(yǎng)基 655
25.13.2匯合飼養(yǎng)層 655
25.13.3懸浮克隆 658
25.13.4異種移植 658
25.14細胞系的建立 659
25.14.1原代腫瘤培養(yǎng)物的
傳代 659
25.14.2連續(xù)細胞系 659
25.15腫瘤細胞培養(yǎng)物的特征 660
25.15.1腫瘤細胞的異質(zhì)性 660
25.15.2組織型培養(yǎng) 661
25.16特殊類型腫瘤 661
25.16.1乳腺 661
25.16.2肺 662
25.16.3胃 663
25.16.4結(jié)腸 663
25.16.5胰腺 664
25.16.6卵巢 664
25.16.7前列腺 664
25.16.8膀胱 665
25.16.9皮膚 665
25.16.10子宮頸 666
25.16.11肢質(zhì)細胞瘤 666
25.16.12神經(jīng)母細胞瘤 667
25.16.13精原細胞瘤 667
25.16.14淋巴瘤和白血病 667
參考文獻 667
第26章 干細胞 677
26.1胚胎干細胞 677
26.1.1小鼠胚胎干細胞的誘導(dǎo) 677
26.1.2小鼠胚胎干細胞的傳代培養(yǎng)和擴增 677
26.1.3人胚胎干細胞的原代培養(yǎng) 678
26.1.4魚胚胎來源的多能干細胞 680
26.2生殖細胞 680
26.3胚外細胞 680
26.3.1羊水細胞的培養(yǎng) 680
26.3.2從新生兒或青年來源的細胞 680
26.3.3成人來源的多能干細胞 680
26.3.4人骨髓來源間充質(zhì)干細胞 681
26.3.5前列腺上皮干細胞 681
26.3.6牙上皮干細胞 681
26.3.7誘導(dǎo)多潛能干細胞 682
26.4造血干細胞 683
26.4.1小鼠骨髓長期培養(yǎng) 686
26.4.2人骨髓長期培養(yǎng) 686
26.5再生醫(yī)學(xué)中干細胞的應(yīng)用 687
26.6腫瘤干細胞 690
參考文獻 691
第27章 培訓(xùn)綱要 697
27.1目的 697
27.2實驗制備及操作技巧 699
27.3基本的細胞培養(yǎng)技術(shù) 711
27.4高階練習(xí) 734
27.5特殊練習(xí) 749
參考文獻 749
第28章 問題與對策 750
28.1細胞異常形態(tài) 750
28.2細胞生長緩慢 751
28.2.1僅限于自己細胞出了問題 751
28.2.2其他人也遇到同樣的問題 751
28.3培養(yǎng)基 752
28.3.1試劑配方、準(zhǔn)備和存儲 752
28.3.2不穩(wěn)定試劑 754
28.3.3配制培養(yǎng)基各種成分的純度 754
28.4基質(zhì)和容器 755
28.5微生物污染 755
28.5.1僅限于單個實驗者的問題 '755
28.5.2普遍問題 756
28.5.3室內(nèi)供氣和層流凈化工作臺 757
28.5.4特定污染 758
28.6化學(xué)污染 758
28.6.1玻璃器皿 758
28.6.2移液管 759
28.6.3水的純化 759
28.6.4低溫凍存 759
28.6.5粉末或氣溶膠 759
28.7原代培養(yǎng) 759
28.7.1原代培養(yǎng)的存活率低 759
28.7.2選擇細胞錯誤 761
28.7.3污染 761
28.8分化 761
28.9飼養(yǎng) 762
28.9.1常規(guī)單層培養(yǎng) 762
28.9.2克隆培養(yǎng) 762
28.10傳代 762
28.10.1收獲率低或生長緩慢 762
28.10.2生長不均勻 763
28.11克隆 764
28.11.1培養(yǎng)皿形成的克隆數(shù)過低 764
28.11.2培養(yǎng)皿形成的克隆數(shù)太多 765
28.11.3非隨機分布 765
28.12交叉污染和錯誤標(biāo)記 765
28.13凍存 765
28.13.1復(fù)蘇時存活率低 765
28.13.2凍存后細胞彤態(tài)發(fā)生變化 766
28.13.3凍存細胞丟失 767
28.14細胞計數(shù) 767
28.14.1用血細胞計數(shù)板計數(shù) 767
28.14.2使用阻抗法電子計數(shù)儀計數(shù) 767
參考文獻 768
第29章 結(jié)語 769
附錄I計算配制及試劑制備 770
參考文獻 787
附錄II術(shù)語 788
參考文獻 796
附錄III儀器與試劑4
附錄Ⅳ其他
索引 797
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