本書作為《海洋酶工程》課程的配套實驗教材,針對《海洋酶工程》課程中所涉及的相關(guān)實驗如產(chǎn)酶微生物的篩選、鑒定、酶基因克隆、異源表達(dá)和純化、酶的固定化、酶分子的改造等實驗內(nèi)容進(jìn)行順序編排,選取了各個知識點的經(jīng)典實驗進(jìn)行編寫。書中內(nèi)容涵蓋了海洋酶工程研究整個過程的始終,從海洋微生物的篩選、分離、純化、鑒定到基因組的提取、目標(biāo)基因的克隆、表達(dá)、純化、性質(zhì)表征和產(chǎn)物分析。此外,還補(bǔ)充了海洋宏基因組文庫的構(gòu)建、野生型酶的純化以及酶固定化等內(nèi)容,以及酶工程下游產(chǎn)物的分離純化及活性評價等內(nèi)容。
適讀人群 :本科生或者研究生教材
書中內(nèi)容涵蓋了海洋酶工程研究整個過程的始終
朱本偉副教授一直致力于新型海洋多糖水解酶的挖掘及其結(jié)構(gòu)與功能研究,研究工作主要集中在開發(fā)新型海洋多糖水解酶方面,并利用酶法等生物方法將天然碳水化合物資源轉(zhuǎn)化為功能食品或功能產(chǎn)品,重點研究如何綠色高效地從多糖降解制備得到寡糖;進(jìn)而對此過程中重要的海洋酶進(jìn)行發(fā)現(xiàn)、創(chuàng)制、改造及機(jī)制研究并取得了較好的研究成果。
實驗室安全須知 ( 1 )
實驗一 普通光學(xué)顯微鏡的使用 ( 2 )
實驗二 玻璃器皿的清洗、 包扎和干熱滅菌 ( 9 )
實驗三 培養(yǎng)基的制備與高壓蒸汽滅菌 ( 13 )
實驗四 海洋微生物的接種、 分離及無菌操作 ( 17 )
實驗五 海洋細(xì)菌的簡單染色技術(shù) ( 24 )
實驗六 海洋細(xì)菌的革蘭氏染色技術(shù) ( 27 )
實驗七 海洋細(xì)菌的芽孢染色技術(shù) ( 30 )
實驗八 海洋細(xì)菌的莢膜染色技術(shù) ( 32 )
實驗九 海洋細(xì)菌的鞭毛染色技術(shù) ( 34 )
實驗十 海洋放線菌的觀察 ( 36 )
實驗十一 海洋酵母菌的觀察 ( 38 )
實驗十二 海洋霉菌的觀察 ( 40 )
實驗十三 海洋細(xì)菌的平板菌落計數(shù)法 ( 44 )
實驗十四 海洋細(xì)菌生長曲線的測定 ( 47 )
實驗十五 海洋細(xì)菌的生理生化反應(yīng) ( 49 )
實驗十六 海洋細(xì)菌的分離及鑒定 ( 53 )
實驗十七 海洋細(xì)菌基因組 DNA 的提取 ( 55 )
實驗十八 海洋酵母菌的分離及鑒定 ( 57 )
實驗十九 聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白相對分子質(zhì)量 ( 59 )
實驗二十 Folin-酚試劑法(Lowry 法)測定蛋白濃度 ( 62 )
實驗二十一 尺寸排阻色譜分離純化幾丁質(zhì)酶 ( 64 )
實驗二十二 果膠酶的包涵體復(fù)性 ( 66 )
實驗二十三 海洋宏基因組文庫構(gòu)建及目標(biāo)基因篩選 ( 68 )
實驗二十四 褐藻膠裂解酶編碼基因重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 ( 71 )
實驗二十五 褐藻膠裂解酶重組質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)及純化 ( 73 )
實驗二十六 褐藻膠裂解酶活性測定及酶動力學(xué)參數(shù)測定 ( 76 )
實驗二十七 褐藻膠裂解酶的酶學(xué)性質(zhì)表征 ( 78 )
實驗二十八 褐藻膠裂解酶產(chǎn)物分析 ( 80 )
實驗二十九 殼聚糖酶重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 ( 82 )
實驗三十 殼聚糖酶重組質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)及純化 ( 84 )
實驗三十一 殼聚糖酶活性測定及酶動力學(xué)參數(shù)測定 ( 87 )
實驗三十二 殼聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)表征 ( 89 )
實驗三十三 殼聚糖酶的產(chǎn)物分析 ( 91 )
實驗三十四 κ-卡拉膠酶重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 ( 93 )
實驗三十五 κ-卡拉膠酶重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá) ( 95 )
實驗三十六 κ-卡拉膠酶的磁珠純化 ( 97 )
實驗三十七 κ-卡拉膠酶的酶學(xué)性質(zhì)表征 (100)
實驗三十八 κ-卡拉膠酶的降解產(chǎn)物分析 (102)
實驗三十九 石莼多糖裂解酶重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 (104)
實驗四十 石莼多糖裂解酶重組質(zhì)粒異源表達(dá)及純化 (106)
實驗四十一 石莼多糖裂解酶活性測定及酶動力學(xué)參數(shù)測定 (109)
實驗四十二 石莼多糖裂解酶酶學(xué)性質(zhì)表征 (111)
實驗四十三 石莼多糖裂解酶降解產(chǎn)物分析 (113)
實驗四十四 重組果膠酶的固定化 (115)
實驗四十五 卡拉膠寡糖的活性評價 (117)
附錄 (120)
附錄1 微生物常用培養(yǎng)基配方 (120)
附錄2 微生物染色常用染液配方 (149)
附錄3 海洋產(chǎn)酶微生物篩選常用方法 (150)
附錄4 無菌操作基本要求和超凈工作臺的使用管理 (156)
附錄5 超凈工作臺的使用管理 (157)
參考文獻(xiàn) (158)