本書以基因表達調控原理與基因工程的支撐技術為前提,主要論述了三部分內容:涉及基因高效表達、重組表達產物活性回收、基因工程菌(細胞)穩(wěn)定生產等基因工程基本原理;包括DNA 的切接反應、重組DNA分子的轉化、轉化子的篩選與重組子的鑒定五大基因工程單元操作;以大腸桿菌和酵母兩個典型的基因工程受體系統(tǒng)為主線,結合具體的產業(yè)化案例,歸納出基因工程技術的實際應用戰(zhàn)略。本書可作為高等院校生物工程、生物技術、食品工程等專業(yè)本科生學習“基因工程”課程的教材,課堂教學建議學時為32學時,也可供從事生物工程技術研究和開發(fā)的人員參考。
第1章 概述
1.1 基因工程的基本概念 ………………………………………………………………… 1
1.2 基因工程的發(fā)展歷史 ………………………………………………………………… 5
1.3 基因工程的研究意義 ………………………………………………………………… 7
第2章 基因表達調控的原理與技術
2.1 啟動子調控模型……………………………………………………………………… 10
2.1.1 啟動子的組成及其功能…………………………………………………………… 10
2.1.2 啟動子的順式增強作用…………………………………………………………… 14
2.1.3 啟動子的反式協(xié)同作用…………………………………………………………… 16
2.1.4 啟動子結構的多樣性……………………………………………………………… 19
2.2 操縱子調控模型……………………………………………………………………… 22
2.2.1 操縱子基因表達調控的基本原理………………………………………………… 22
2.2.2 乳糖操縱子………………………………………………………………………… 24
2.2.3 半乳糖操縱子……………………………………………………………………… 28
2.2.4 阿拉伯糖操縱子…………………………………………………………………… 29
2.2.5 色氨酸操縱子……………………………………………………………………… 30
2.2.6 λ噬菌體的操縱子 ………………………………………………………………… 31
2.3 感受應答調控模型…………………………………………………………………… 34
2.3.1 感受應答調控模型的基本原理…………………………………………………… 34
2.3.2 真核生物轉錄調控元件的相互作用……………………………………………… 37
2.3.3 真核生物轉錄調控因子的激活方式……………………………………………… 39
2.4 RNA結構調控模型 ………………………………………………………………… 40
2.4.1 終止子的工作原理………………………………………………………………… 40
2.4.2 衰減子的工作原理………………………………………………………………… 42
2.4.3 反義子的工作原理………………………………………………………………… 44
2.5 RNA剪切編輯調控模型 …………………………………………………………… 46
2.6 基因工程的支撐技術 ……………………………………………………………… 47
2.6.1 核酸凝膠電泳技術………………………………………………………………… 47
2.6.2 核酸分子雜交技術………………………………………………………………… 49
2.6.3 細菌轉化轉染技術………………………………………………………………… 55
2.6.4 聚合酶鏈反應技術………………………………………………………………… 59
2.6.5 DNA序列分析技術 ……………………………………………………………… 64
2.6.6 寡核苷酸合成技術………………………………………………………………… 67
2.6.7 基因定點突變技術………………………………………………………………… 70
第3章 基因工程的單元操作
3.1 工具酶 ………………………………………………………………………………… 74
3.1.1 限制性核酸內切酶………………………………………………………………… 74
3.1.2 T4DNA連接酶…………………………………………………………………… 79
3.1.3 DNA聚合酶 ……………………………………………………………………… 79
3.1.4 核酸酶……………………………………
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